分光光度計是理化分析中常用的儀器。它的基本原理是建立在光與物質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)上，當(dāng)光子和某一溶液中吸收輻射的物質(zhì)分子相碰撞時，就發(fā)生吸收，測量其吸光度值的大小可反映某種物質(zhì)存在的量的多少。光的吸收程度與濃度有一定的比例關(guān)系，這就是的比直定律。該定律成立的必要條件是單色光（單一波長光）照射樣品。為了使該定律具有良好的線性，對測量濃度有一定的范圍要求。
分光光度計使用方法步驟：
1)預(yù)熱儀器。為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。
2)選定波長。根據(jù)要求，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。
3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
4)調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。
5)調(diào)節(jié)T=100%。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的*格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100%，即表頭指針恰好指在T=100%處。
6)測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。
7)關(guān)機(jī)。實(shí)驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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